Ensayo de RT-PCR en tiempo real basado en SYBR Green I para la detección de coronavirus bovino

Resumen

El coronavirus bovino (BCoV) está asociado a tres síndromes clínicos diferentes: síndrome diarreico neonatal del ternero, la disentería de invierno que provoca enteritis hemorrágica en bovinos adultos y el síndrome respiratorio asociado con la fiebre de embarque, todos con un impacto negativo en el bienestar animal y significativas pérdidas económicas en las industrias cárnica y lechera. El diagnóstico de laboratorio de infecciones causadas por virus se basa fundamentalmente en métodos serológicos y moleculares. El objetivo de este estudio fue desarrollar un ensayo de PCR en tiempo real basado en SYBR Green I para la detección de BCoV, mediante la amplificación de un fragmento del gen de la nucleocápsida viral. Se optimizaron los parámetros de los componentes críticos de la reacción de PCR y las condiciones termodinámicas. El análisis de la curva de disociación confirmó la especificidad de las curvas de amplificación (Tm = 85ºC ± 1°C) sin evidencias de amplificaciones inespecíficas. El ensayo mostró altos niveles de especificidad, repetibilidad y sensibilidad, con un límite de detección de 10^3.0 TCID₅₀/mL. La sensibilidad diagnóstica se evaluó en muestras fecales de animales con síntomas clínicos compatibles con disentería de invierno y en animales sin sintomatología clínica de proceso entérico. El nuevo ensayo resultó más sensible que el ensayo de RT-PCR en punto final y el aislamiento viral para el diagnóstico de BCoV.