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oai:ojs.pkp.sfu.ca:article/1340 2025-01-21T07:09:52Z RSA:AO driver

Vitrification of pre-implantation embryos a simple method for the preservation and production of transgenic mice Vitrificación de embriones pre-implantatorios como método simple para la protección y generación de ratones transgénicos Ramos Serrano, Boris Ramos Hernández, Alejandro López García, Yadiel Rodríguez-Suastegui, José Luis Hernández-Pichardo, José Ernesto embryo vitrification transgenic mice mouse embryo cryobanking vitrificación de embriones ratones transgénicos criobancos Vitrification of embryos and gametes is a novel alternative for ex situ preservation and production of transgenic mice. The first objective of this research was to demonstrate the effectiveness of vitrifying 4-cell embryos for the preservation of genetic lines from four transgenic mouse models: 1) Ataxia, 2) Human transferrin, 3) CD46 receptor, and 4) transgenic mice expressing green fluorescent protein (GFP). A second objective was to produce transgenic offspring from vitrified pronuclear embryos that had been genetically modified via lentiviral transgenesis. The embryos obtained from non-transgenic mice served as the control group. Those embryos at the 4-cell and pronuclear stages were collected 55 hours and 18 hours, respectively, after superovulatory treatment. The embryos collected were vitrified using specific mixtures of DMSO, ethylene glycol and sucrose; and they were subsequently stored in liquid nitrogen until needed. In vitro and in vivo survival was evaluated in each experimental group, as well as the principal cytostructural damage suffered by the embryos after thawing. In the first experiment, a high embryonic survival rate was reached in all four transgenic lines after the vitrification of embryos at the 4-cell stage, ranging from 91,5 % to 100 %. In the case of in vivo development, no significant differences were observed in the percentages of viable offspring born among the transgenic lines Ataxia (49,5 %), Transferrin (47 %) and CD46 receptor (24,4 %), compared to the vitrified control group (38,3 %) (p>0,05). The main cytostructural damages observed were the rupture of the zona pellucida and lysis of blastomeres, with percentages differing among groups. In the case of pronuclear embryos, a 19,9 % viable offspring rate was obtained (n=52 live births/266 embryos transferred). Of these, 25 % (n=13/52) of the offspring obtained were transgenic, resulting in an overall efficiency of 4,5 % (n=13/266) for lentiviral transgenesis using vitrified pronuclear embryos. The results obtained demonstrate that embryo vitrification is an effective method for preserving mouse lines and producing transgenic mice through lentiviral transgenesis. La vitrificación de embriones y gametos es una novedosa alternativa para la protección ex situ y generación de ratones transgénicos. Un primer objetivo de este trabajo fue demostrar la efectividad de la vitrificación de embriones en 4-células con el propósito de conservar el genofondo de cuatro líneas de ratones transgénicos: 1) Ataxia, 2) Transferrina humana, 3) receptor CD46 y 4) ratones transgénicos que expresan la proteína verde fluorescente (PVF); un segundo objetivo, fue obtener crías transgénicas a partir de embriones pronucleares vitrificados y modificados genéticamente por lentitransgénesis. En ambos experimentos fueron utilizados como grupo control embriones obtenidos de ratones no transgénicos. Los embriones en los estadios 4-células y pronucleares fueron obtenidos a las 55 h y 18 h post tratamiento superovulatorio, en cada caso. Los embriones colectados fueron vitrificados en sus correspondientes mezclas de DMSO, etilen glicol y sucrosa, y conservados en nitrógeno líquido hasta su uso. Post descongelación fue evaluada la supervivencia in vitro e in vivo en cada grupo experimental y se determinaron los principales daños citoestructurales que sufrieron los embriones. En el primer grupo experimental, los embriones vitrificados en estadio de 4-células, se logró una alta tasa de supervivencia embrionaria post descongelación en las cuatro líneas transgénicas (rango 91,5% a 100%). En el caso del desarrollo in vivo, no se observaron diferencias significativas en los porcentajes de crías nacidas viables entre las líneas transgénicas Ataxia 49,5%, Transferrina 47%, Receptor CD46 24,4% vs control vitrificado 38,3% (p<0,05), respectivamente). Como principales daños citoestructurales se observó la ruptura de la zona pelúcida y lisis de blastómeros, con porcentajes que difieren entre grupos. En el caso de los embriones pronucleares se obtuvo una tasa de desarrollo in vivo de 19,9% de crías viables (n=52 crías nacidas/ 266 embriones transferidos). De éstas un 25% de las crías obtenidas fueron transgénicas (n=13/52), para una eficiencia general por lentitransgénesis utilizando embriones pronucleares vitrificados de 4,5% (n=13/266). Los resultados obtenidos corroboran la efectividad de la vitrificación de embriones con fines de protección de genofondos y la generación de ratones modificados genéticamente por lentitransgénesis. Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria 2024-07-28 info:eu-repo/semantics/article info:eu-repo/semantics/publishedVersion application/pdf text/html application/epub+zip application/zip https://censa.edicionescervantes.com/index.php/RSA/article/view/1340 Revista de Salud Animal; Vol. 46 (2024): enero-diciembre; https://cu-id.com/2248/v46e13 Revista de Salud Animal; Vol. 46 (2024): enero-diciembre; https://cu-id.com/2248/v46e13 2224-4700 0253-570X spa https://censa.edicionescervantes.com/index.php/RSA/article/view/1340/2469 https://censa.edicionescervantes.com/index.php/RSA/article/view/1340/2470 https://censa.edicionescervantes.com/index.php/RSA/article/view/1340/2471 https://censa.edicionescervantes.com/index.php/RSA/article/view/1340/2472 Derechos de autor 2025 Licencia CC Reconocimiento-NoComercial 4.0 Internacional (CC BY-NC 4.0) https://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0