Caracterización de la microbiota bacteriana asociada al ostión ( <i>Crassostrea</i>sp) procedente de tres zonas de cultivo de Cuba

Introducción

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Los ostiones son moluscos del grupo de los bivalvos, al que pertenecen gran número de especies comestibles que el hombre aprovecha como alimento por su alto valor nutritivo y por las grandes posibilidades que tiene su cultivo (11. Bermúdez-Medranda A, Panta-Vélez R, Cáceres-Farías L, Lodeiros C. Índices de Contaminación Bacteriana en la Ostra Crassostrea cf. corteziensis Procedente de Portovelo, Estuario Río Chone, Manabí, Ecuador. Rev Int Contam Ambie. 2022;38:463-71. https://doi.org/10.20937/RICA.54239
). Estos son organismos bentónicos filtroalimentadores y algunas especies tienen como hábitat los estuarios y deltas de ríos, con aguas someras y salobres.

En Cuba habitan dos especies de ostión, el Crassotrea rhizophorae, conocido como "ostión de mangle", y el Crassotrea virginica, denominado nacionalmente como "ostión de fondo", ambas especies constituyen recursos en explotación comercial (22. Betanzos-Vega R, Martínez-Pérez A, López-Rodríguez S. Diversificación productiva en la industria pesquera cubana: cultivo de ostión como alternativa sostenible. Cuba Pesca. 2023;29(3):34-42.
).

La industria pesquera cubana en la actualidad está diversificando sus producciones debido a la poca disponibilidad de recursos pesqueros. En ese sentido, el cultivo de ostión constituye una alternativa factible con impacto positivo en la economía y en la salud ambiental del área y su población (33. Betanzos Vega A, Arencibia Carballo G, Flores Gutiérrez ER, Tizol Correa R, Mazón Suástegui JM, Macías Aguilera E, et al. El ostión cubano: elementos bioecológicos, diagnóstico y potencialidad. En: Betanzos Vega A, editor. Manual de Buenas Prácticas: cultivo artesanal de ostión en Cuba. La Habana: GAIA; 2023. p. 16-30. ISBN 978-959-287-093-2.
). Al ser un organismo filtrador puede participar en la depuración de las aguas donde habita, pero también juega un papel fundamental en la transmisión de enfermedades ya que su capacidad de filtración y acumulación de materia orgánica favorece la presencia de bacterias en su interior.

Sin embargo, el éxito del cultivo de ostión depende en gran medida del conocimiento profundo de los factores biológicos y ambientales que influyen en su desarrollo, entre los cuales la microbiota asociada juega un papel central. La microbiota asociada a la masa de ostión comprende el conjunto de microorganismos que habitan en el producto y su entorno, incluyendo bacterias, arqueas, hongos y virus (11. Bermúdez-Medranda A, Panta-Vélez R, Cáceres-Farías L, Lodeiros C. Índices de Contaminación Bacteriana en la Ostra Crassostrea cf. corteziensis Procedente de Portovelo, Estuario Río Chone, Manabí, Ecuador. Rev Int Contam Ambie. 2022;38:463-71. https://doi.org/10.20937/RICA.54239
). Estos microorganismos pueden ser benéficos, contribuyendo a la nutrición y la defensa inmunológica del molusco, o potencialmente patógenos, capaces de provocar enfermedades que afectan la productividad y la calidad del producto final (44. González-Fernández D, Morales-Sánchez E, Ruiz-López M. Microbiota asociada a cultivos de ostión: implicaciones para la salud y productividad. J Aquac Res Dev. 2024;11(1):10-18.
). Como es un producto que se consume mayormente crudo, el análisis de la microbiota permite identificar riesgos sanitarios, anticipar brotes de enfermedades y diseñar estrategias de manejo preventivo, lo cual es esencial en un contexto de cambio climático y eventos ambientales extremos que pueden alterar la composición microbiana y aumentar la susceptibilidad a infecciones (55. Romero-Pérez A, Sánchez-López F, Hernández-Torres J. Impacto del cambio climático en la microbiota de ostiones y estrategias de manejo preventivo. Rev Ambient Acuic. 2023;7(2):25-33.
).

Conocer la microbiota asociada a los cultivos de ostión resulta fundamental no solo por la salud de los individuos y la inocuidad alimentaria, sino también por la sostenibilidad y competitividad del sector ostrícola. Dado que en las zonas estudiadas no existen reportes previos que describan la microbiota del ostión, el objetivo de este trabajo fue caracterizar la microbiota asociada a la masa del ostión procedente de bahía de Cabaña, bahía Honda y Yaguacam.

Materiales y Métodos

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Descripción del área de estudio

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Las áreas de muestreo seleccionadas para el estudio de la microbiota asociada al ostión corresponden a las regiones noroccidental y central de Cuba. En la provincia de Artemisa (zona noroccidental) se muestrearon bahía de Cabaña (Latitud 22°59'15" Norte y Longitud 82°57'39" Este) (66. Pelegrín-Morales E, Siam-Lahera C, Arencibia-Carballo G, Alvarez-Capote JS. Valoración de la Bahía de Cabañas para el cultivo de pepino de mar Isostichopus badionotus en Cuba. REDVET. Rev electrón vet. 2009;10(10):1-9.
) y bahía Honda (Latitud: 22° 54' 23'' Norte y Longitud: 83° 9' 49'' Oeste) (77. Núñez Rodríguez M. Legado africano en la identidad cultural de Bahía Honda [tesis]. La Habana: Universidad de La Habana; 2012.
) y en la provincia de Cienfuegos (zona central) se muestreó Yaguacam (Latitud 20° 20′ 10,08″ Norte y Longitud - 77° 7′ 55,073″ Oeste) (88. Rubio-Limonta M, Silveira-Coffigny R, Hernández-Martínez D.A, Beloborodova A, Pozo-Escobar, M. Prevalencia de enfermedades en el camarón de cultivo L. vannamei en Cuba.. Revista Cubana de Investigaciones Pesqueras. 2020, 37 (2): 57-65, ISSN 0138-8452.
).

Detección de la microbiota

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Fueron recolectadas 50 unidades de ostión por sitio de muestreo, para un total de 150 animales, las cuales se trasladaron en bolsas de polietileno a una temperatura de 5-7 °C al laboratorio de bacteriología del Centro de Investigaciones Pesqueras, en la Habana donde fueron realizados los análisis.

Preparación de las muestras para su análisis bacteriológico

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Se extrajo la masa de las muestras de ostión, la cual fue transferida a un mortero de porcelana previamente esterilizado. Posteriormente se hicieron homogenados por área de muestreo en bolsas con 11 g de masa de ostión y 99 mL de solución salina peptonada para obtener la suspensión inicial (99. NC ISO 6887-1. Microbiología de la cadena alimentaria - Preparación de la muestra de ensayo, la suspensión inicial y las diluciones decimales para pruebas microbiológica. Parte1: Reglas generales para la preparación de la suspensión inicial y las diluciones decimales. 2023. (ISO 6887-1:2017, IDT)
). A partir de la suspensión inicial se tomaron 20 μL que fueron sembrados en placas Petri con los medios de cultivos Agar Triptona Soya (TSA 1 %), Tiosulfato Citrato Bilis Sacarosa (TCBS), Agar Cromogénico AGN y Agar Cetrimide por diseminación. Posteriormente se incubaron a 35 °C durante 24 h (1010. Hernández-Mendoza DM, San Martín-del ÁP, Jiménez-Torres C, Hernández-Herrera RI. Monitoreo de vibrio spp. en ostiones Crassostrea virginica de las lagunas de Tamiahua y Tampamachoco, Veracruz, México. Rev Biológico Agropecuaria Tuxpan. 2021;9(1). https://doi.org/10.47808/revistabioagro.v9i1.346
). Se efectuó la selección de las colonias atendiendo a su color, forma, borde, elevación, tamaño, opacidad y consistencia, la cuales fueron transferidas a tubos con Agar Triptona Soya inclinado suplementado con 1 % de NaCl, siendo incubadas a 35 °C por 24 horas.

Se realizó la tinción de Gram para caracterizar los microorganismos de acuerdo a su morfología y coloración. Se ejecutaron las pruebas bioquímicas: oxidasa, catalasa, sulfuro-indol-motilidad (SIM), descarboxilación de los aminoácidos (arginina, ornitina, lisina), utilización del citrato, hidrólisis de la esculina y urea, halotolerancia, fermentación de los azúcares: glucosa, lactosa, sorbitol, xilosa, maltosa, arabinosa, trealosa y manitol (1111. Buller, N.B. Bacteria from fish and other Aquatic Animals a Practical Identification Manual. CABI publishing, London. 2004.
).

Los resultados obtenidos de las pruebas bioquímicas se introdujeron en el programa ABIS online (1212. ABIS online. https://www-tgw1916-net.translate.goog/bacteria_logare_desktop.html?_x_tr_sl=en&_x_tr_tl=es&_x_tr_hl=es&_x_tr_pto=tc, 2025
) para la identificación taxonómica de las cepas.

Análisis Estadístico

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Para el procesamiento de los resultados se empleó el software IBM-SPSS versión 27. Se realizó la prueba de Kruskall- Wallis para muestras independientes con el objetivo de verificar la distribución de porciento de identificación (%) entre categorías de microbiota, seguido de la prueba de correlación de Spearman entre los parámetros zona de cultivo, microbiota y porciento de identificación.

Resultados y Discusión

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Las muestras procedentes de bahía de Cabaña, bahía Honda y Yaguacam mostraron conteos bacterianos promedio de 2,3x10³, 2,2x10³ y 3,6x10³ UFC/g respectivamente. Los recuentos de aerobios mesófilos registrados en las tres zonas estudiadas de Cuba concuerdan con lo reportado en el estero el Riito, municipio de Huatabampo, Sonora, donde los valores no sobrepasaron el límite de 5x10⁵ UFC/g (1313. Moreno Valenzuela D. Evaluación de la calidad sanitaria en ostión del estero El Riito, Sonora en el procedente de Yavaros, Huatabampo [Tesis]. Sonora: Instituto Tecnológico de Sonora; 2005.
).

La composición de la microbiota en animales acuáticos se considera dinámica y no una entidad fija, lo cual quedó evidenciado al observar que el 70,6 % de las cepas aisladas fueron Gram negativas. Por zonas, los porcentajes de aislamientos Gram negativos fueron 29,2 % (n= 13), 20,8 % (n=9) y 50 % (n=12) en las zonas 1, 2 y 3 respectivamente (Tabla 1). Dentro de este grupo predominó la morfología bacilar por encima de la forma coccídea. Este hallazgo coincide con investigaciones previas de Araújo-Magalhães y col. (1414. Araújo-Magalhães GR, Maciel MHC, da Silva LF, Agamez-Montalvo GS, da Silva IR, Bezerra JDP. Prevalence and antibiotic resistance of Gram-negative bacteria in oysters (Crassostrea gigas) from aquaculture zones in Southeast Brazil. Braz J Microbiol. 2021;52(3):1431-41. https://doi.org/10.1007/s42770-021-00505-3
), quienes reportaron una proporción mayor de bacterias Gram negativas (68 %), lo que refuerza la tendencia de las bacterias Gram negativas con morfología bacilar a constituir el grupo microbiano dominante en la microbiota asociada al cultivo del ostión. Esta prevalencia se atribuye a la contaminación orgánica presente en el entorno acuático, dado que, las bacterias Gram negativas suelen estar implicadas en la descomposición de materia orgánica y pueden funcionar como indicadores de calidad ambiental deficiente (1515. Pérez-Faraldo B, González-Isla F. Infecciones por bacilos gramnegativos no fermentadores: agentes etiológicos de infecciones asociadas a la atención sanitaria. Correo Científico Médico, 2017; 21(4), 1197-1200 http://sciel.sld.cu
).

Sin embargo, es importante señalar que los resultados obtenidos difieren parcialmente de los mencionados por Martínez y col. (1616. Martínez L, Fernández P, et al. Microbial Community Shifts in Oysters (Ostrea edulis) from Varied Coastal Environments: Gram-Positive Dominance in Pristine Zones. J Appl Microbiol. 2022. https://doi.org/10.1111/jam.15489
), quienes reportaron una menor proporción de cepas Gram negativas (45 %) en muestras similares. Estas diferencias pueden estar atribuidas como expresa Al-Marri y col. (1717. Al-Marri S, Eldos H.I, Ashfaq M.Y, Saeed S, Skariah S, Varghese L, Mohaoud Y.A, Sultan A.A, Raja M.M. Isolation, identification, and screening of biosufactant producing and hydrocarbon degrading bacteria from oil and gas industrial waste. Biotechnology Reports. 2023; 39 https://doi.org/10.1016/j.btre.2023.e00804
), a las metodologías utilizadas en el aislamiento y la identificación de las cepas, así como a variaciones en las condiciones ambientales y los niveles de contaminación orgánica en los sitios de muestreo.

Tabla 1. Características morfoculturales y tintoriales de las cepas aisladas de las muestras de ostión en las tres zonas de cultivo. / Morphological and staining characteristics of the strains isolated from the oyster samples in the three cultivation zones.

Zona	No de Cepa	Gram	Características morfo-culturales
Bahía de Cabaña (zona 1)	1, 2,	G -	Cocobacilos, colonia beige pequeña plana de borde irregular.
	3, 4, 5, 10, 13	G +	Bacilos esporulados, colonia blanca pequeña redonda de borde regular.
	6	G -	Bacilos, colonia rosada claro plana de borde irregular sin halo.
	7	G -	Cocobacilos, colonia clara plana con centro elevado
	8, 9, 11	G -	Bacilos, colonia mediana violeta claro de bordes regulares sin halo.
	12	G +	Bacilos gruesos en cadenas, colonia grande como copo de nieve.
Bahía Honda (zona 2)	1, 8	G +	Bacilos cortos, gruesos sueltos y en cadenas
	2, 4, 7	G-	Cocobacilos
	3, 6	G-	Bacilos
	5, 9	G +	Coco
Yaguacam (zona 3)	1, 2,	G-	Bacilos, colonia pequeña casi transparente.
	3, 5,	G-	Cocobacilos, colonia blanca grande
	4, 6	G-	Cocobacilos, colonia pequeña traslúcida
	7, 8, 9, 10, 11, 12	G-	Cocobacilos, colonia morada pequeña sin halos traslúcidos.

Las pruebas bioquímicas siguen siendo una herramienta fundamental en estudios de microbiota bacteriana porque permiten caracterizar rasgos fenotípicos relevantes que ayudan a diferenciar grupos bacterianos, evaluar potencial patogénico y orientar el diseño de análisis moleculares posteriores (1818. Ponce-Alonso P.M. Herramientas para el estudio de la microbiota y aplicaciones terapéuticas basadas en su modulación. Tesis doctoral. 2022. https://docta.ucm.es/entities/publication/746de493-ab19-4e1c-b07f-e6764cea85be.
). En la tabla 2 se observa una heterogeneidad fenotípica entre las tres zonas de cultivo del ostión en Cuba, probablemente asociadas a variables ambientales o a fuentes de contaminación locales.

Tabla 2. Porcentaje de cepas positivas a pruebas bioquímicas según la zona de cultivo. / Percentage of strains positive for biochemical tests by cultivation zone.

Pruebas bioquímicas	Zona 1	Zona 2	Zona 3
Oxidasa	69	0	83
Catalasa	85	100	67
Sulfhídrico	8	0	50
Indol	8	0	0
Motilidad	92	67	83
Citrato	54	No efectuada	50
Esculina	0	56	17
Urea	15	22	83
0 %	69	100	100
6 %	62	89	25
8 %	31	No efectuada	50
10 %	0	22	0
Xilosa	46	No efectuada	0
Manosa	62	67	No efectuada
Inositol	8	0	No efectuada
Arabinosa	15	No efectuada	No efectuada
Trealosa	69	No efectuada	100
Arginina	85	67	No efectuada
Ornitina	38	22	No efectuada
Lisina	77	0	0
Glucosa	69	44	92
Lactosa	15	100	No efectuada
Maltosa	No efectuada	78	No efectuada
Sacarosa	No efectuada	100	25
Manitol	No efectuada	89	50
Sorbitol	No efectuada	No efectuada	50

Mientras la mayoría de los aislamientos de las zonas 1 y 3 resultan oxidasa y catalasa positivos, la zona 2 muestra oxidasa negativa y catalasa positiva en todos los casos evaluados, indicando diferencias entre los grupos dominantes entre zonas. La motilidad es alta en las tres zonas, lo que concuerda con la prevalencia de bacterias móviles asociadas a superficies marinas (1919. Bernabel E.E.G. Identificación fenotípica y molecular de bacterias productoras de biofilm presentes en la formación del biofuling en cultivos de conchas de abanico (Agropecten purpuratus) en la bahía de Huaynuma, Casma-Peru.. Tesis doctoral. Universidad Nacional Mayor de San Marcos. 2019 https://core.ac.uk/download/pdf/323347201.pdf
).

Las identificaciones taxonómicas de los aislados en muestras de ostión en las tres zonas de cultivo se muestran en las figuras 1, 2 y 3 respectivamente.

Figura 1. Familias bacterianas aisladas de muestras de ostión en Bahía de Cabañas. / Bacterial families isolated from oyster samples in Bahía de Cabañas.

En bahía de Cabaña, la identificación bacteriana permitió agrupar las colonias aisladas en siete familias (Figura 1). En esta zona, predominaron las especies pertenecientes a las familias Vibrionaceae y Bacillaceae, representando el 42 % del total de aislamientos.

Los resultados obtenidos en el presente estudio muestran notable concordancia con los hallazgos de Luis-Villaseñor y col. (2020. Luis-Villaseñor IE, Zamudio-Armenta OO, Voltolina D, Rochin-Arenas JA, Gómez-Gil B, Audelo-Naranjo JM, et al. Comunidades bacterianas de los ostiones de placer (Crassostrea corteziensis) y kumamoto (C. sikamea) de la bahía cospita, Sinaloa, México. Rev Int Contam Ambient. 2018;34(2):273-82. https://doi.org/10.20937/RICA.2018.34.02.09
), en lo que respecta al predominio de bacterias pertenecientes a las familias Vibrionaceae y Bacillaceae detectados en las especies Crassostrea corteziensis y C. sikamea, lo cual confirma lo expresado por Baker-Austin y col. (2121. Baker-Austin C, Jenkins C, Dadzie J, Mestanza O, Delgado E, Powell A, Bean T, Martínez-Urtaza, J. Genomic epidemiology of domestic and travel-associated Vibrio parahaemolyticus infections in the U.K, 2008-2018. Food Control. 2020; 115, 107244. DOI: https://doi.org/10.1016/j.foodcont.2020.107244
), sobre que estas familias bacterianas representan un componente ubicuo y potencialmente clave de la microbiota asociada a estos moluscos bivalvos. La presencia de Bacillus spp. podría indicar una influencia del ambiente circundante, dado que estas bacterias son comunes en el suelo y el agua (2222. Terefe M, Tefera T, Sakhuja PK. Effect of a formulation of Bacillus firmus on root-knot nematode Meloidogyne incognita infestation and the growth of tomato plants in the greenhouse and nursery. J Invertebr Pathol. 2009;100(2):94-9. https://doi.org/10.1016/j.jip.2008.11.004
).

Existen diversas especies pertenecientes a la familia Vibrionaceae que se encuentran ampliamente distribuidas en ecosistemas acuáticos; entre ellas destacan Vibrio mimicus y Vibrio campbellii reportados por Barrera-Escorcia y col. (2323. Barrera-Escorcia G, Botello AV, Wong-Chang I, Fernández-Rendón CL. Contaminación microbiológica de la laguna de Tampamachoco, Veracruz, México. En: Botello AV, Rendón von Osten J, Benítez JA, Gold-Bouchot G, editores. Golfo de México. Contaminación e impacto ambiental: diagnóstico y tendencias. Mérida: UAC, UNAM-ICMyL, CINVESTAV-Unidad Mérida; 2014. p. 653-70. ISBN 978-607-7887-71-3.
), en ostiones provenientes de la laguna de Tampamachoco, México, los que como señala Sampaio y col. (2424. Sampaio A, Silva V, Poeta P, Aonofriesei F. Vibrio spp.: Strategies, Ecology, and Risks in a Changing Enviorement.. Microbial Diversity in Aquatic Systems, 2022; 14 (2),97., https://doi.org/10.3390/d14020097
) actúan como patógenos oportunistas, lo cual indica un riesgo potencial para la salud humana en caso de consumirse ostiones contaminados.

La presencia de Enterobacterias en moluscos ha sido ampliamente documentada por diversos autores (2525. Sekhi RJ, Al-Samarraae IAA. Isolation and characterization of Citrobacter freundii from sheep and detection of some of their virulence genes using PCR technique. Eur Scholar J. 2022;3(2):105-15.
, 2626. Ionone P, Baliou S, Kofteridis D. Ewingella americana infections in humans-a narrative review. Antibiotics. 2024; 13(6):559. https://doi.org/10.3390/antibiotics13060559
), quienes enfatizan la importancia de un monitoreo continuo, debido a que, como indica Bravo (2727. Bravo JI. Distribución y abundancia de bacterias pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae presentes en la laguna de Mecoacán, Tabasco durante dos temporadas climáticas [Tesis de Licenciatura]. Ciudad de México: Universidad Autónoma Metropolitana, Unidad Xochimilco; 2019.
), estas familias bacterianas incluyen patógenos que presentan una alta morbilidad y son capaces de provocar intoxicaciones graves e incluso mortalidad.

En las muestras de ostión procedentes de bahía Honda se identificaron nueve familias bacterianas (Figura 2), donde cinco de ellas fueron aisladas en la zona de estudio anterior.

Figura 2. Familias bacterianas aisladas de muestras de ostión en Bahía Honda. / Bacterial families isolated from oyster samples in Bahía Honda.

En un estudio realizado por Salgueiro y col. (2828. Salgueiro V, Reis L, Ferreira E, Botelho MJ, Manageiro V, Caniça M. Evaluación de la composición de la comunidad bacteriana de moluscos bivalvos recolectados de granjas acuícolas y su respectiva susceptibilidad a los antibióticos. Antibióticos. 2021;10:1135. https://doi.org/10.3390/antibiotics10091135
) sobre la composición de la comunidad bacteriana de bivalvos, se identificaron nueve familias distintas, entre las cuales destacan Bacillaceae, Yersiniaceae, Pseudomonadaceae, Enterobacteriaceae y Moraxellaceae, coincidiendo con las familias aisladas en bahía Honda. Zannella y col. (2929. Zannella C, Fly F, Mariani F, Franci G, Folliero V, Galdiero M, et al. Microbial diseases of bivalve mollusks: Infections, immunology and antimicrobial defense. Mar Drugs. 2017;15(6):182. https://doi.org/10.3390/md15060182
) señalan que las bacterias del género Pseudomonas están presentes tanto en ambientes acuáticos como en la microbiota comensal de los bivalvos. Además, algunas de estas bacterias, especialmente las pertenecientes al filo Proteobacteria, desempeñan un papel crucial en el metabolismo de los moluscos bivalvos, ya que son capaces de fijar nitrógeno en el tracto gastrointestinal y degradar compuestos como celulosa y agar (3030. Mazón-Suástegui J, Tovar-Ramírez D, Ortiz-Cornejo NL, García-Bernal M, López-Carvallo J, Salas-Leiva J, et al. Efecto de medicamentos homeopáticos sobre crecimiento, supervivencia y microbiota gastrointestinal, en juveniles del pectínido Argopecten ventricosus. Rev MVZ Córdoba. 2020;24(3). https://doi.org/10.21897/rmvz.1536
).

Existen numerosos estudios que reportan infecciones humanas causadas por las familias bacterianas previamente descritas, las cuales incluyen infecciones de heridas, enfermedades transmitidas por alimentos (particularmente por la ingesta de moluscos crudos), mionecrosis, septicemia, fasciitis necrosante, empiema, bacteriemia, endocarditis, así como infecciones severas de las vías respiratorias, urinarias y biliares, meningitis y queratitis (3131. Suárez V. Estimación del riesgo a la salud por consumo de ostión Americano (Crassostrea virginica) depurado mediante tecnologías avanzadas de oxidación (mezclas UV/Ozono) [Tesis]. Veracruz: Universidad Veracruzana; 2012 https://cdigital.uv.mx
, 3232. Froelich BA, Noble RT. Vibrio bacteria in raw oysters: Managing risks to human health. Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. 2016;371(1689):20150209. https://doi.org/10.1098/rstb.2015.0209
, 3333. Hernández HA. Aislamiento de bacterias patógenas de transmisión alimentaria resistentes a antimicrobianos a partir de productos del mar [Tesis]. Ciudad de México: UNAM; 2024.
).

Asimismo, las familias Enterobacteriaceae y Staphylococcaceae identificadas en el estudio en cuestión, habitan la microbiota intestinal humana y en la superficie de la piel de humanos y animales (3434. Bacardi-Sarmiento E. Microbiota intestinal en la salud humana. Revista Cubana de Medicina. 2022; 61 (3). http://scielo.sld.cu
). Estos resultados muestran similitud con los citados por Hernández (3333. Hernández HA. Aislamiento de bacterias patógenas de transmisión alimentaria resistentes a antimicrobianos a partir de productos del mar [Tesis]. Ciudad de México: UNAM; 2024.
), quien aisló estas familias bacterianas en bivalvos recolectados en las costas de México.

Bacillaceae comprende diversas especies del género Bacillus, algunas de las cuales han sido aisladas en ambientes marinos, vinculado según Tejera y col. (3535. Tejera B, Heydrich M, Rojas M. Antagonismo de Bacillus spp. Frente a hongos fitopatógenos del cultivo del arroz (Oryza sativa L.). Revista de Protección Vegetal 2012; 27 (2), 117-122 http://scielo.sld.cu/scielo.php
) con la actividad agrícola predominante en las regiones estudiadas, pues especies como B. firmus y B. thuringiensis, son reconocidas por su uso como agentes de control biológico de patógenos de relevancia agrícola (2222. Terefe M, Tefera T, Sakhuja PK. Effect of a formulation of Bacillus firmus on root-knot nematode Meloidogyne incognita infestation and the growth of tomato plants in the greenhouse and nursery. J Invertebr Pathol. 2009;100(2):94-9. https://doi.org/10.1016/j.jip.2008.11.004
).

En este sentido, es posible que la presencia de Bacillaceae en las zonas de cultivo de ostión se deba a escurrimientos provenientes de áreas agrícolas cercanas, los cuales pueden transportar bacterias desde el suelo hacia los cuerpos de agua, alterando la composición de la microbiota acuática. Este fenómeno concuerda con los resultados obtenidos por Orozco-Rojas y col. (3636. Orozco-Rojas Dafne ID, Monroy-Dosta M, Bustos-Martínez J, Ocampo-Cervantes J, Barajas-Galván E, Ramírez-Torrez J. Estatus bacteriológico y calidad del agua de cultivo en granjas acuícolas ornamentales de Morelos, México. Abanico Vet. 2022;12. https://abanicoacademico.mx/revistasabanico-version-nueva/index.php/abanico-veterinario/article/view/62
), en granjas acuícolas en el estado de Morelos, México. Este hallazgo, en conjunto con los resultados del presente estudio, sugiere que la contaminación por escurrimientos agrícolas representa una fuente significativa de Bacillaceae en ecosistemas acuícolas. Ciertas especies de Bacillus son beneficiosas y se emplean como probióticos en acuicultura; no obstante, otras pueden contribuir al deterioro de productos marinos y afectar la salud de los organismos cultivados (2222. Terefe M, Tefera T, Sakhuja PK. Effect of a formulation of Bacillus firmus on root-knot nematode Meloidogyne incognita infestation and the growth of tomato plants in the greenhouse and nursery. J Invertebr Pathol. 2009;100(2):94-9. https://doi.org/10.1016/j.jip.2008.11.004
, 3737. Roy P.K, Roy A, Jeon E.U, Mireles C.A, Park J. W, Young P. S. Análisis exhaustivo de bacterias y virus patógenos predominantes en productos del mar.. Revisiones integrales en ciencia y seguridad alimentaria, 2024; 23 (4). https://doi.org/10.1111/1541-4337.13410
).

En cuanto a la familia Burkholderiaceae, esta puede albergar bacterias tanto beneficiosas como patógenas, incluyendo especies de Burkholderia que causan infecciones oportunistas. En un estudio sobre la microbiota asociada a almejas, reportó que en ostras adultas la comunidad bacteriana estaba compuesta principalmente por los géneros Burkholderia y Yersinia, lo que resalta la complejidad y variabilidad de esta familia en ambientes marinos (3838. Gerpe D. Estudio de la microbiota asociada a almeja fina (Ruditapes decussatus) y almeja japonesa (Ruditapes philippinarum) mediante técnicas de secuenciación masiva [Tesis de Doctorado]. Santiago de Compostela: Universidad de Santiago de Compostela; 2019.
).

De las familias bacterianas identificadas en Yaguacam (Figura 3), predominaron Vibrionaceae con un 60 % seguida por Hafniaceae con un 20 %, Pseudomonadaceae y Aeromonadaceae representaron cada una el 10 % restante. De los aislados obtenidos, el 50 % fue identificado hasta nivel de especie, destacándose Vibrio salmonicida, Vibrio negripulchritudo, Vibrio fluvialis y Edwardsiella ictaluri.

Figura 3. Familias bacterianas aisladas de muestras de ostión en Yaguacam. / Bacterial families isolated from oyster samples in Yaguacam.

Los hallazgos de este estudio se contextualizan en el marco de la literatura regional sobre la microbiota asociada a moluscos bivalvos. La mayoría de los estudios revisados sobre aislamientos de Vibrio en bivalvos latinoamericanos se han enfocado en especies como V. parahaemolyticus, V. alginolyticus, V. vulnificus y V. brasiliensis (2020. Luis-Villaseñor IE, Zamudio-Armenta OO, Voltolina D, Rochin-Arenas JA, Gómez-Gil B, Audelo-Naranjo JM, et al. Comunidades bacterianas de los ostiones de placer (Crassostrea corteziensis) y kumamoto (C. sikamea) de la bahía cospita, Sinaloa, México. Rev Int Contam Ambient. 2018;34(2):273-82. https://doi.org/10.20937/RICA.2018.34.02.09
, 3939. Muñoz N, de Marín M, Marval M, Martínez E. Identificación de bacterias del género Vibrio asociadas a zonas productoras de moluscos bivalvos, Estado Sucre, Venezuela. Rev Cient. 2012;22(5):459-66. https://produccioncientificaluz.org/index.php/cientifica/article/view/15738
), mientras que la presencia de V. salmonicida, agente etiológico de septicemia hemorrágica en peces de aguas frías, no ha sido documentada en moluscos bivalvos de la región (4040. Utani-Cayllahua S. Estado situacional de la crianza de truchas arcoíris (Oncorhynchus mykiss) en centros de cultivo de la provincia de Abancay, Apurímac [Tesis]. Abancay: Universidad Nacional Micaela Bastidas de Apurímac; 2023 http://repositorio.unamba.edu.pe/handle/UNAMBA/1274
).

Respecto a las familias Aeromonadaceae y Hafniaceae, aunque su documentación es menos frecuente, su presencia en ambientes acuáticos y en moluscos bivalvos ha sido confirmada en estudios recientes (2828. Salgueiro V, Reis L, Ferreira E, Botelho MJ, Manageiro V, Caniça M. Evaluación de la composición de la comunidad bacteriana de moluscos bivalvos recolectados de granjas acuícolas y su respectiva susceptibilidad a los antibióticos. Antibióticos. 2021;10:1135. https://doi.org/10.3390/antibiotics10091135
).

La figura 4 muestra los resultados de la prueba de Kruskal- Wallis aplicada a muestras independientes para comparar la abundancia relativa de familias bacterianas. El resultado obtenido (p=0,34) indica ausencia de diferencias estadísticamente significativas para una significación a=0,05.

A pesar de que la familia Vibrionaceae mostró la mayor representación relativa en las muestras estudiadas, el análisis estadístico no confirmó diferencias entre las familias detectadas. La prevalencia relativa de Vibrionaceae en bivalvos es coherente con su ecología ya que estas bacterias son habituales en ambientes marinos costeros. Además, la capacidad de algunos miembros de esta familia para formar biopelículas y colonizar tejidos de bivalvos contribuye a su detección recurrente en estos hospederos (4141. Jurquiza V, Fraga S.G, Costagliola M, Pichel M. Aislamiento, identificación y caracterización de Vibrio parahemolyticus en muestras de aguas, sedimentos y moluscos bivalvos de la costa atlántica de Buenos Aires. Universidad Nacional de San Martin, Mar del Plata, Argentina. 2014. https://www.researchgate.net/profile/Veronica-Jurquiza/publication/319710902.
).

Figura 4. Distribución de las familias bacterianas según el porciento de identificación en las tres zonas de cultivo. / Distribution of bacterial families according to the identification percentage in the three cultivation zones.

La correlación de Spearman demostró una correlación positiva no muy intensa entre la microbiota identificada y la zona de cultivo (Tabla 3). La carga microbiana presente en los bivalvos está estrechamente relacionada con las características y condiciones de la zona de cultivo. Los bivalvos son organismos filtradores que concentran microorganismos presentes en el agua, lo que hace que su carga microbiana sea un reflejo directo de la calidad microbiológica del entorno en el que se cultivan (1313. Moreno Valenzuela D. Evaluación de la calidad sanitaria en ostión del estero El Riito, Sonora en el procedente de Yavaros, Huatabampo [Tesis]. Sonora: Instituto Tecnológico de Sonora; 2005.
, 3838. Gerpe D. Estudio de la microbiota asociada a almeja fina (Ruditapes decussatus) y almeja japonesa (Ruditapes philippinarum) mediante técnicas de secuenciación masiva [Tesis de Doctorado]. Santiago de Compostela: Universidad de Santiago de Compostela; 2019.
).

Tabla 3. Correlación de Spearman. / Spearman correlation.

			zona de cultivo	microbiota	porciento de identificación (%)
Rho de Spearman	zona de cultivo	Coeficiente de correlación	1,000	,447^*	,038
		Sig. (unilateral)	.	,024	,438
		N	20	20	20
	Microbiota	Coeficiente de correlación	,447^*	1,000	-,287
		Sig. (unilateral)	,024	.	,110
		N	20	20	20
	porciento de identificación (%)	Coeficiente de correlación	,038	-,287	1,000
		Sig. (unilateral)	,438	,110	.
		N	20	20	20

^*. La correlación es significativa en el nivel 0,05 (unilateral).

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Artículo original

Caracterización de la microbiota bacteriana asociada al ostión (Crassostrea sp) procedente de tres zonas de cultivo de Cuba

Characterization of the bacterial microbiota associated with oysters (Crassostrea sp) from three cultivation zones in Cuba